Способы взятия крови у морских свинок

Взятие небольших количеств крови можно проводить после нанесения насечек на край уха или прокола ступни. Для предупреждения быстрого свертывания крови ушную раковину покрывают тонким слоем парафина.
Получить большое количество крови у ненаркотизированных животных можно по методу Г.В. Федорова (1961). На лапке в области кисти бритвой делают разрез и просовывают ее сквозь резиновую манжетку в толстостенную пробирку (гусек), из которой вакуумным насосом откачивают воздух. Кровь собирается на дне пробирки. Таким способом легко удается получить 1—4 мл крови, не подвергая опасности жизнь подопытного животного. Вакуумным насасыванием можно получить кровь из ушной вены.
Кровь у наркотизированных морских свинок, как и у других лабораторных животных, можно брать из пещеристого синуса. Для этого во внутренний угол глаза, между орбитой и глазным яблоком, проводят иглу вдоль кости в горизонтальном направлении и шприцем насасывают кровь (Г. Ребигер).
Пункция сердца. Манипуляцию проводят под наркозом. Перед пункцией выстригают шерсть и дезинфицируют кожу. Местом пункции служит второе межреберье слева на 1—1,5 см краниальнее от конца processus xiphordeus. От левого края грудины отступают на 2 мм и вертикальным уколом прокалывают грудную клетку. Если игла находится в желудочке сердца, то при потягивании поршня кровь поступает в полость шприца. Если в шприц поступают пузырьки воздуха или серозной жидкости, это указывает, что игла находится в легких. В таких случаях иглу нужно вытянуть несколько назад.
Пункцией сердца у крупных морских свинок можно получить до 10—12 мл крови. Забор следует производить не чаще одного раза в неделю
При пункции сердца морской свинки кровь можно получать вакуумным способом, описанным Т.А. Луценко (1961).
В.H. Зильфян и В.А. Кумкумджян (1970) рекомендуют следующий метод взятия крови у мелких лабораторных животных. Указательным и большим пальцами левой руки, одетой в перчатку для предохранения от укусов, животное берут за мягкие ткани дорсальной части шеи так, чтобы кожа несколько натянулась, и фиксируют животное в вертикальном положении. Таким образом создается застой венозной крови в области головы. Животное при этом открывает полость рта (нужно следить, чтобы при чрезмерном натягивании кожи не вызвать удушья). Сухим марлевым тампоном, зажатым в пинцет, насухо вытирают нижние резцы, десны и слизистую нижней губы. После этого бритвой или скальпелем производят неглубокий надрез наружной поверхности десны между резцами, затем анатомическим пинцетом оттягивают нижнюю губу, что способствует образованию полости, в которой собирается вытекающая из раны кровь. После взятия крови рану обрабатывают спиртом, кровотечение быстро останавливается.
Описанным способом у крыс, морских свинок одновременно можно взять до 2—3 мл крови, а у мышей и хомячков — до 1 мл. После взятия крови из десны не отмечалось нарушения здоровья у животных, раны быстро заживали. Картина крови, взятой предлагаемым методом, не отличается от картины крови у того же животного, взятой из хвоста. Метод позволяет брать кровь многократно и в необходимых количествах.

Взятие крови у лабораторных животных и ее обработка

Небольшое количество крови получают у кроликов и мор­ских свинок из вен уха, у мышей и крыс—из вен хвоста, а большие количества — из сердца. В особых случаях прибега­ют к полному, или тотальному, обескровливанию, после кото­рого животное погибает.

Для пункции сердца животных фиксируют к доске брюш­ком кверху. Шерсть в области груди тщательно выстригают, кожу обрабатывают спиртовым раствором йода и после этого приступают к проколу, который в зависимости от вида жи­вотного имеет некоторые различия.

Пункция сердца кроликов. Определяют II пальцем, обра­ботанным спиртом и смазанным спиртовым раствором йода, сердечный толчок, т. е. точку наиболее сильно выраженной пульсации сердца. Обычно она прощупывается в третьем межреберье. Прокол грудной клетки делают в области сер­дечного толчка на расстоянии 2—4 мм от левого края гру­дины; иглу ведут в направлении к средней линии на глубину 2—2,5 см. При попадании иглы в полость сердца рука, в ко­торой находится шприц, начинает ощущать ритмичные толч­ки, связанные с пульсацией сердца и приподнимающие иглу. Поршень шприца легко выдвигается наружу и в цилиндре его тотчас появляется кровь. Взятие крови должно произво­диться по возможности быстрее во избежание ее свертыва­ния. По этой же причине шприц и иглу рекомендуется промы­вать перед опытом стерильным раствором цитрата или оксалата натрия. Взяв необходимое количество крови, быстрым движением, без рывка, вынимают иглу и на месте укола на­кладывают ватный тампон, пропитанный спиртовым раство­ром йода. Животному подкожно вводят подогретый до тем­пературы тела стерильный изотонический раствор хлорида натрия или глюкозу в количестве, равном двойному объему взятой крови. Пункцией сердца можно получить у кролика 25—30 мл крови.

Пункция сердца у морских свинок. Кончиками III—IV пальцев левой руки нащупывают сердечный толчок, в на­правлении которого вертикально на глубину 1,5—2 см вка­тывают иглу, отступя на 1—2 мм от левого края грудины. У морских свинок можно получить таким образом 10—12 мл крови.

Пункция сердца у крыс. Как и в предыдущих случаях, пальпаторно определяют место сердечного толчка. На 1 см выше от установленной точки и на 1—2 мм левее от края гру­дины делают прокол на глубину 1,5—2 см, держа иглу вер­тикально. Одномоментно у крыс можно получить 6—8 мл крови.

Тотальное обескровливание кролика. Вскрывают одну из сонных артерий, расположенных по обеим сторонам трахеи. Для получения стерильной крови руки оперируемого должны быть тщательно вымыты и обработаны спиртом или спирто­вым раствором йода, все инструменты предварительно необ­ходимо простерилизовать.

Подготовленного для кровопускания кролика привязывают станку брюшком кверху, фиксируя голову кольцом к штативу. Шерсть на шее тщательно выстригают, кожу дезинфи­цируют. К носу животного прикладывают кусочек ваты, смо­ченной эфиром. После того как наступит состояние наркоза, скальпелем делают разрез по средней линии шеи и разводят края раны пинцетом. Сонные артерии проходят по бокам тра­хеи в яремном желобке между веной и нервом. Сверху артерия прикрыта грудино-подъязычной и грудино-щитовидной мышцами. Поэтому для обнаружения нервно-сосудистого пучка эти мышцы разделяют тупым концом скальпеля или браншами пинцета. Артерию освобождают от окружающей соединительной ткани и подводят под нее две лигатуры. Ближай­шую к головке лигатуру завязывают двойным узлом, позади второй лигатуры на расстоянии 0,3—0,5 см накладывают пе­ан. Между лигатурой и пеаном маленькими остроконечными ножницами делают продольный разрез сосуда длиной не бо­лее 1,5—2 мм, вставляя в него канюлю (стеклянную трубочку с оттянутым капилляром, кончик которой скошен и хорошо оплавлен). Кончик вставленной канюли укрепляют второй лигатурой. После этого под резиновую трубку, надетую на расширенную часть канюли, подставляют пробирку или фла­кон и снимают пеан с артерии, чтобы кровь могла вытекать свободно. Обескровливание морских свинок про­изводят так же, как и кроликов.

Взятие крови из вены уха кролика. Для получения крови из краевой вены нужно, прежде всего, вызвать гиперемию уха, потирая его ладонями рук и слегка ударяя кончиками паль­цев. Затем вдоль наружного края уха удаляют пушок и про­тирают ватой, увлажненной 70% спиртом. Если в результате всех перечисленных процедур сосуды не инъецируются, ухо смазывают ксилолом или толуолом. После того как сосуды набухнут и четко обозначатся на поверхности ушной ракови­ны, наружную поверхность ее покрывают тонким слоем жид­кого парафина (во избежание быстрого свертывания крови) и делают прокол вены.

Для получения небольшого количества крови (менее 1 мл) прокалывают одну из небольших периферических ветвей, а для получения больших объемов крови (5—10 мл) вскрывают краевую вену уха. С этой целью иглу шприца вводят в вену почти параллельно поверхности уха, чтобы не повредить про­тивоположную стенку вены. При проколе вены иглой шприца кровь, как правило, выходит отдельными каплями с боль­шими интервалами, и кровотечение прекращается быстро. Для того, чтобы вызвать обильное кровотечение, нужно сде­лать ранку с рваными краями. С этой целью пользуются об­ломком тонкого капилляра пастеровской пипетки. При таком способе прокола из уха кролика получают до 30 мл крови. После взятия крови к проколу вены прикладывают на 2—3 минуты кусочек сухой стерильной ваты, не нажимая сильно на стенку сосуда, так как при этом кровотечение может усилиться. Если кровотечение долго не прекращается, хорошие ре­зультаты дает нанесение на ранку нескольких капель пе­рекиси водорода.

Взятие крови из вен у морских свинок, крыс и мышей. У морских свинок кровь в количестве 0,3—0,5 мл получают после нанесения насечек на край уха или прокола мягких по­душек лапы.

У белых крыс и мышей для получения 1—3 капель кро­ви приходится прибегать к ампутации кончика хвоста пос­ле продолжительного прогревания его в воде температуры 45—50°С или протирания ксилолом. Взяв кровь, рану прижигают перекисью водорода.

Есть способ, позволяющий получить у крыс 0,5—1 мл крови из венозного сплетения, ле­жащего в орбите, позади глазного яблока. Взятие крови про­изводят стеклянной пипеткой с оттянутым капилляром (на­ружный диаметр 0,6 мл), острие которого сточено под уг­лом 45°.

Животное берут I и II пальцами левой руки со стороны спины за шею и слегка сдавливают с боков, вызывая легкое выпячивание глаз. Вращательным движением пипетки дела­ют прокол конъюнктивального мешка в медиальном углу гла­за между глазным яблоком и орбитой. После прокола пипет­ку ведут в направлении гортани на глубину 4—5 мм. Попа­дание в венозное сплетение сопровождается заполнением ка­пилляра пипетки кровью.

Получение дефибринированной крови. Кровь животного сливают в стерильную колбу со стеклянными бу­сами и непрерывно в течение 10—15 мин встряхивают. В ре­зультате встряхивания находящийся в крови фибрин выпада­ет в осадок, обволакивая бусы, а дефибринированная кровь, слитая в другую колбу или пробирку, утрачивает способ­ность свертываться.

Приготовление взвеси эритроцитов. Для ос­вобождения от пленок фибрина дефибринированную кровь фильтруют через трехслойный марлевый фильтр. Фильтрат наливают в центрифужные пробирки и центрифугируют при 2000—3000 об./мин. в течение 10—15 минут. Эритроциты оседают на дно пробирки, а прозрачная, слегка желтоватого цвета плазма образует надосадочный слой. После центрифугирова­ния уровень жидкости в пробирке отмечают карандашом, от­сасывают плазму пастеровской пипеткой, эритроциты промы­вают, доливая до метки стерильный изотонический раствор хлорида натрия, и вновь центрифугируют. Промывание эрит­роцитов с добавлением свежего раствора производят 2—3 разa, чтобы последняя порция промывной жидкости была бес­цветна.

Из промытых эритроцитов готовят 3% или 5% взвесь, прибавляя к 3—5 мл эритроцитов соответственно 97—95 мл изо­тонического раствора хлорида натрия (для получения мень­ших количеств взвеси объемы обоих ингредиентов уменьша­ют в одинаковое число раз).

Взвесь эритроцитов можно хранить в холодильнике при температуре 3—4°С в течение 5—6 дней.

Приготовление сыворотки крови. Кровь, со­бранную в стерильную пробирку, закрывают ватно-марлевой пробкой, ставят на 20—30 мин в термостат или водяную ба­ню, отрегулированную на 37°С, так как в тепле кровь свер­тывается быстрее и лучше. Во время свертывания сгусток крови обычно прилипает к стенкам пробирки. Поэтому после взятия пробирок из термостата сгусток отделяют от стенок пробирки круговым движением капилляра стерильной пасте­ровской пипетки или стеклянной стерильной палочкой.

После отделения сгустка сыворотку ставят в холодильник при температуре 3—4°С. В течение 3—4 ч сыворотка обычно отделяется полностью, и ее можно отсосать стерильной пасте­ровской пипеткой. Для того чтобы во время отсасывания со­держимое пробирки было хорошо видно, пастеровскую пи­петку соединяют со стеклянной трубкой — «мундштуком» (ре­зиновая трубка длиной 20—25 см). При отсасывании кончик пипетки не должен соприкасаться со сгустком крови, чтобы в сыворотку не попали эритроциты.

Окрашенную в розовый цвет сыворотку центрифугируют при 2000—3000 об./мин. в течение 10—15 мин для осаждения форменных элементов крови.

При взятии крови вскоре после кормления животных, а также при повторных кровопусканиях с короткими интерва­лами возникает иногда липемия, т. е. появление избытка жи­ровых веществ в крови. Сыворотки, получаемые во время липемии, бывают мутные (хилезные), иногда опалесцирующие, и это очень затрудняет чтение диагностических реакций, осо­бенно реакции преципитации. Во избежание получения мут­ных сывороток кровь у животных берут натощак. Просветле­ние липемической плазмы наступает также при введении в кровеносное русло животного гепарина, способствующего по­вышению концентрации в крови фермента, называемого фак­тором просветления. С этой целью кроликам весом 2—2,5 кг в краевую вену уха вводят за 1—1,5 ч до обескровливания 60 мг гепарина.

Форменные элементы из крови удаляют центрифугирова­нием. В слитой с осадка плазме через короткое время после центрифугирования образуется сгусток фибрина, который уп­лотняется при перемешивании крови стеклянной палочкой. Затем этот сгусток удаляют. В некоторых случаях фибрин из плазмы выпадает не полностью. Для удаления остатков фиб­рина и выявления полноты его удаления к сыворотке при­бавляют несколько капель тромбина. Освобожденную от фиб­рина сыворотку фильтруют через асбестовые фильтры. Полу­ченная таким способом сыворотка совершенно прозрачна и не имеет признаков опалесценции.

Приготовление цитратной крови. Полученную из сердца или вены кровь сливают в пробирку с 5% раство­ром цитрата натрия (10 мл крови, 1 мл цитрата натрия). Цитратная кровь не свертывается.

Приготовление плазмы крови. Цитратную кровь ставят на 18—20 ч в холодильник или подвергают центрифу­гированию. В результате над осадком эритроцитов образуется прозрачный слой жидкости желтоватого цвета—плазмы.

Забор крови у грызунов

Автор: Кузнецов Петр Александрович

К представителям отряда грызунов, ставшим домашними питомцами, обычно относятся морские свинки, крысы, мыши, шиншиллы.

Анализы крови могут потребоваться врачу-ратологу (специалисту по грызунам) для проведения диагностики и уточнения общего состояния животного.

У более крупных представителей отряда (крысы, морские свинки, шиншилы) кровь можно получить из вены, находящейся на внутренней поверхности бедра (вена Сафена) или вены запястья. Если животное агрессивно – процедура может быть проведена под общей анестезией.

В процедуре обычно участвуют 2 ветеринарных специалиста. Проводится асептическая обработка месте взятия крови. Вена аккуратно пережимается выше места взятия. Проводится прокол вены и взятие нужно количества образца крови.

У мышей, в связи с их миниатюрностью, получить анализ крови крайне затруднительно. В случае необходимости анализ можно получить из хвостовой вены. Однако, есть риск атрофии хвоста после этой процедуры.

Общий объем крови у грызуна 55-70 мл/кг. То есть у крысы около 15-20 мл, у мыши около 4-5мл. Безопасно для животного единовременное взятие до 10% от общего объема крови. Таким образом, у крысы можно получить анализ 1,5-2 мл, которого хватит для исследования на 6-8 показателей. У мыши только 0,4-0,5 мл, такой объем можно исследовать на 1-3 показателя. При необходимости можно взять больший объем крови, в этом случае дефицит должен быть восполнен инфузией полиэлектролитного раствора.

В целом, процедура взятия крови достаточно проста и безопасна, однако требует участия квалифицированного специалиста.

Статья подготовлена Кузнецовым П.А.,
ветеринарным врачом-кардиологом, анестезиологом «МЕДВЕТ»
© 2015 СВЦ «МЕДВЕТ»