ДНК тест, для чего и зачем? 22.06.2019

Нам часто задают вопрос о том, проводим ли мы ДНК тест щенков или нет. Хотим сразу ответить, что да, мы не скрываем происхождение наших малышей и при вашем желании сделаем ДНК тест. Но сразу оговоримся, что данная процедура не входит в стоимость щенков, а а также, поскольку является вашей инициативой, то оплачивается вами дополнительно к стоимости щенка.

Это новомодное исследование анонсируется некоторыми заводчиками дизайнерских пород для оправдания завышенных цен на щенков. А также, чтобы добавить «солидности» питомнику или клубу. Мы считаем, что добросовестным заводчикам нету смысла лишний раз подчеркивать свою значимость. В то же время, если покупатель хочет сделать данный тест будущему питомцу, то почему бы и нет. И все же, поскольку тенденция спроса ДНК теста у наших клиентов присутствует, мы решили разъяснить, что это за исследование и в каких ситуациях оно действительно вынужденная необходимость.

Разновидностей ДНК тестов очень много. Зачастую их используют, чтобы узнать о врожденных болезнях. Известно, что не только люди, но и многие породы собак, кошек и др. животных имеют так называемые генетические (наследственные) болезни или отклонения. Так, например, у лабрадоров около 20% всех собак несет мутацию, вызывающую прогрессирующую атрофию сетчатки, для такс эта цифра еще более устрашающая — 50%. Такое тяжелое заболевание, как цистинурия у ньюфаундлендов присутствует в скрытом виде в 15% случаев (статистические данные взяты здесь ). Также сейчас в результате ДНК теста выдают так называемый ДНК паспорт собаки. Это более надежное средство идентификации собаки в случае пропажи, чем клеймление, которое может частично или полностью исчезнуть, или чипирование. В случае же определения родства делается ДНК тест на отцовство. То есть должен быть проведен тест у трех собак: щенка, папы и мамы. Только в этом случае вы получите достоверную информацию о происхождении малыша. Причем такой тест можно проводить как у чистопородных собак, чтобы убедиться в породности щенка, а также в отсутствии инцеста, так и у смешанных пород собак. Например , в случае с мальтипу, в исследовании должны участвовать три породы: пудель, мальтезе и их потомственный щенок мальтипу.

Дадим пару советов, чтобы избежать подложного ДНК теста, настаивайте на том, чтобы заводчик провел исследование папы, мамы и щенка при вашем присутствии в лаборатории. Сохраняйте копию квитанции, выданной в лаборатории при проведении исследования. Если же ДНК тест проведен до вашего посещения заводчика, то нет гарантии, что именно те собаки, что вам предъявляют как родителей участвовали в исследовании. В этом случае вы можете как минимум проверить сам результат ДНК теста на предмет его актуальности. На бланке отчета должны быть контакты лаборатории, дата, а также номер исследования. Никто не мешает вам убедиться существует ли такая лаборатория, а также проводилось ли такое исследование в этой лаборатории в эту дату, под таким-то номером и его результат. Поэтому мы не делаем ДНК тесты самостоятельно, а только по инициативе покупателя и всегда предлагаем присутствовать на нем, чтобы видеть какие именно собаки приехали на изъятие проб.

Также существует ДНК тест на определение породы собаки, а также на определение состава пород, если речь идет о смешении. Достоверной информации о том, делают ли такие тесты в России и в частности в Москве, мы не нашли. Пока это не настолько распространенное исследование и делается в единичных лабораториях США и Англии. История этого ДНК исследования такова: В 2007 году компанией «MetaMorphix» был предложен тест «The Canine Heritage Breed Test». Владелец собаки в течение 4-6 недель получает результат: оформленный «Сертификат анализа ДНК породы собаки». Существенный недостаток этого тестирования заключался в том, что эта компания имела дело только с наиболее распространенными породами. Таким образом, если Ваша собака происходит от предков необычной породы, наиболее вероятно, что тест не способен обнаружить фактическую породу Вашей собаки.

ДНК тест на породу

Вот так выглядит результат проведения ДНК теста на породу. Если внимательно посмотреть на этот результат, то можно увидеть, что ряд предков не удалось точно идентифицировать и они записаны как «неизвестный терьер».

Существует еще несколько компаний, предлагающих анализ ДНК различной стоимости, основанные на различном количестве исходных пород (до 157), различной степени точности (до 90%!), базируемые также и на анализе крови. Однако владельцы собак должны иметь в виду, что такие тесты могут определить возможную родословную Вашей собаки только приблизительно. Для более точной оценки генетического происхождения должен проводиться другой тип теста ДНК, когда берут образцы ДНК от Вашей собаки и собаки возможного родителя.

Ученые Центра Фреда Хатчинсона исследовали образцы ДНК собак около ста самых распространенных пород. В рамках этой программы они обнаружили, что многие породы не обладают тысячелетней историей, как заявляют кинологи. На самом деле эти породы были восстановлены заводчиками в результате их племенной деятельности.

Ученые сравнивали гены как разных пород между собой, так и гены внутри одной породы. В результате анализа полученных данных все породы смогли разделить на четыре группы: охранные, охотничьи, пастушьи и древние. Внутри каждой группы была обнаружена та или иная схожесть.

Еще больший интерес вызвал тот факт, что ряд пород вообще является результатом скрещивания собак с другими животными. К примеру, анализ ДНК чихуахуа указывал на то, что это разновидность крупного грызуна, из которого в течение нескольких веков выводили некое подобие собаки. У ши-тсу обнаружили родство с горностаем, у пекинеса — с китайской водяной крысой, у лхасского апсо — с тибетским снежным кроликом. Причем генетически эти породы только на 10% являются собаками. Конечно, в это трудно поверить, но научные заключения говорят о другом.

В результате этих исследований ведущие кинологические организации мира (Американского AKC, Бельгийской FCI, Английского KC, Канадского CKC) обсуждают, стоит ли такие породы собак вообще причислять к собакам, и, возможно, их стоит удалить их своих классификаций. Хотя, что тогда делать с теми заводчиками и владельцами, которые разводят эти породы, организуют выставки, получают титулы и т.д…. Это тоже нужно учитывать…

Поэтому будьте внимательны при выборе щенка. О том как как отличить благонадежного заводчика от неблагонадежного мы писали ранее.

Генетический тест — выбор биоматериала

Автор: Дарья Крылова, Заведующая отделом молекулярно-генетической диагностики лаборатории «ПОИСК», с 2019 года представитель WSAVA в России.

Каждый живой организм обладает уникальным набором генов. Этот «генетический отпечаток» может многое рассказать о живом существе, которому он принадлежит. Сегодня результаты генетических тестов используются все более широко – в ряде областей анализ ДНК постепенно становится вполне обычным инструментом, позволяющим решить множество задач.

Идентификация индивидуума на основе ДНК (Генетическая дактилоскопия, ДНК-дактилоскопия) – сравнительно молодой метод, открытый британским генетиком Алеком Джеффрисом в 1984 году. Первое время «генетический отпечаток» использовался преимущественно в криминалистике в качестве инструмента раскрытия преступлений. Впоследствии генетический тест стали применять в медицине, сельском хозяйстве и ряде других областей – в том числе для установления родства, выявления различных заболеваний, определения совместимости донора и реципиента при пересадке органов, установления личности жертв катастроф. Исследование ДНК лежит в основе огромного числа научных работ, и нас ждет еще много научных открытий в этой сфере.

Исследование ДНК животных получило распространение в сельском хозяйстве – для выявления генов, ответственных за желаемые и нежелательные признаки и дальнейшей селекции в соответствии с этим знанием (маркер-зависимая селекция, MAS). Генетические тесты в разведении собак и кошек также набирают популярность и становятся все более распространенной методикой. Вот основные задачи, которые позволяет решить исследование ДНК домашних животных:

• Выявление наследственных заболеваний или постановка диагноза у конкретного животного. В некоторых случаях тест ДНК позволяет быстро поставить диагноз или исключить заболевание без использования дорогостоящих и требующих введения в наркоз процедур (например, КТ и МРТ).
• Определение генетического статуса чистопородных животных-производителей в питомнике (здоровый, носитель заболевания, больной). Заводчики прибегают к исследованию ДНК, чтобы сократить вероятность появления в новых пометах некоторых наследственных заболеваний (например, первичный вывих хрусталика или летальный акральный дерматит бультерьеров) и снизить частоту мутации в породе.
• Определение частоты встречаемости аллели с мутацией в популяции (в породе). Эта информация позволяет делать прогнозы о развитии породы и помогает улучшить результаты селекционной работы.
• Ограничение распространения генетических заболеваний с поздним проявлением (например, дегенеративная миелопатия — прогрессирующее поражение спинного мозга, приводящее к потере координации конечностей и параличу). Нередко такие заболевания проявляются во взрослом или пожилом возрасте – уже после того, как животное произвело потомство. В этом случае генетический анализ собаки и полученных от нее щенков/котят позволит выявить и вывести из разведения особей с мутациями, приводящими к развитию данного заболевания.
• Подтверждение данных родословной (подтверждение родства, решение спорных вопросов об отцовстве).
• Создание профайла идентификации животного. В России такое применение генетического теста для собак и кошек не распространено, но в ряде стран ведется работа по созданию баз данных ДНК животных для их идентификации, например, в случае их пропажи или установления отцовства.

ДНК содержится в любом биоматериале (шерсть, перхоть, слюна и пр.), но в настоящее время для проведения генетического теста для кошек и собак преимущественно используются венозная кровь, буккальный эпителий (эпителий внутренней стороны щеки), иногда – когти, срезанные с захватом ткани кровеносного сосуда.

Рассмотрим два вида биоматериала, которые наиболее часто используются для генетической экспертизы.

Венозная кровь часто используется для проведения генетического теста. Некоторые заводчики предпочитают этот биоматериал, считая анализ на его основе наиболее точным. Действительно, высокая точность результата – один из важных преимуществ крови как материала для исследования. В случае анализа крови исключено загрязнение биоматериала ДНК другой особи (как в случае буккального эпителия). Кроме того, отбор крови для генетического теста не имеет никаких специальных ограничений (изменений диеты, голодания и пр.).

К недостаткам этого биоматериала можно отнести следующие факторы:

• Инвазивность. Некоторые владельцы стремятся избежать взятия крови из вены животного. Агрессивность или высокая чувствительность к стрессу могут быть препятствием для взятия крови. Кроме того, для сдачи анализа требуется визит в ветеринарную клинику.
• Сложность транспортировки. Почтовая пересылка образцов крови из других регионов запрещена законом. Хранение и перевозка требуют определенного температурного режима.
• В случае «сухой крови (dry blood spot) стоимость анализа значительно возрастает за счет высокой стоимости реагентов для проведения анализа, что делает использование этого биоматерила для тестирования животных нецелесообразным. Анализ сухой крови используется в судмедэкспертизе, а для конечного потребителя (владельца животного или заводчика) стоимость анализа оказывается неоправданно высокой по сравнению с другими видами биоматериалов.

Кровь из вены для генетического теста отбирается в пробирку с антикоагулянтом (К3ЭДТА), нельзя использовать в качестве антикоагулянта гепарин. Хранится такая пробирка с кровью на дверце холодильника при температуре +4-+8 °С, при транспортировке используется хладагент.

Буккальный эпителий (эпителий внутренней стороны щеки) – еще один распространенный вариант биоматериала для анализа ДНК. Его важное преимущество состоит в простоте забора образца: это можно сделать в домашних условиях, и не нужно вести животное в ветеринарную клинику. Впрочем, стоит отметить, что забор образца у чрезмерно нервных или агрессивных животных может вызвать у владельца трудности, как и любые манипуляции с такими животными.

По точности генетический анализ буккального эпителия сравним с точностью анализа крови, хранение и транспортировка образца не требуют специальных условий. Почтовая пересылка этого биоматериала не сопровождается никакими сложностями, что делает его значительно более подходящим по сравнению с венозной кровью в случае проведения анализа в другом городе.

Основным недостатком буккального эпителия в качестве биоматериала для генетического теста является возможность его загрязнения — попадания в образец биоматериала от других особей. С этим связаны некоторые ограничения и требования к забору пробы:

• За несколько часов до взятия у кошки или собаки эпителия на анализ необходимо исключить их контакт с другими животными (а также убрать чужие игрушки и миски), чтобы избежать попадания в пробу посторонних слюны и других биоматериалов
• За два часа до взятия пробы необходимо исключить кормление животного – это обязательное требование! Нередко к нам в лабораторию поступают загрязненные образцы буккального эпителия именно из-за нарушения этого условия.
• В случае щенков до отъема велика вероятность загрязнения образца материнским молоком и слюной однопометников – ведь щенки постоянно едят – и получения недостоверного результата генетического теста. Следует дождаться отъема или, если это не желательно, то использовать для анализа венозную кровь.

Взятие образца буккального эпителия не требует специальных навыков и знаний. Для забора анализа используется цитощетка (предоставляется лабораторией). Необходимо поместить цитощетку между десной и внутренней стороной щеки животного и, удерживая пасть животного прикрытой, двигать щетку вперед-назад, одновременно прокручивая ее и избегая тычков конца щетки в мягкие ткани ротовой полости животного. Процедуру следует проводить в течение 20-30 секунд (примерно 20-30 движений цитощеткой вперед-назад). Для ориентира – прикладывайте такое же давление, как при чистке зубов. Важно регулировать усилие, чтобы, не травмируя слизистую оболочку, собрать достаточное количество эпителия (чрезмерная «нежность» тут неуместна).

Затем нужно повторить манипуляцию с другой стороны пасти, используя вторую цитощетку. Закончив, положите цитощетки с биоматериалом обратно в упаковку и поместите в обычный почтовый конверт вместе с направлением на исследование. Запечатанный конверт доставьте в лабораторию (или отправьте заказным письмом).

Важно: если вы берете анализ у двух или более животных, обязательно мойте руки перед каждым забором образца, чтобы избежать загрязнения биоматериала.

Цитощетки с буккальным эпителием должны быть герметично закрыты, упаковки подписаны. В остальном же до отправки образца в лабораторию не нужно соблюдать никаких особенных условий хранения – буккальный эпителий можно хранить практически бессрочно при комнатной температуре.

Стоимость и сроки проведения генетического теста не зависят от вида предоставленного материала. Например, в нашей лаборатории анализ делается 7-10 дней, стоимость варьируется от 1000 до 2800 рублей 1 как в случае крови, так и в случае буккального эпителия (для заводчиков существует система скидок). По точности результатов эти два вида биоматериала также практически равноценны.

По моему опыту, чаще всего оптимальным материалом для проведения генетической экспертизы животных является буккальный эпителий – благодаря простоте его получения и транспортировки по сравнению с образцами крови. Исключение составляют случаи, когда невозможно обеспечить двухчасовое голодание (например, новорожденные щенки), или когда анализ нужно взять срочно и есть возможность взять кровь из вены (в условиях клиники). Словом, выбор биоматериала зависит от особенностей животного и от условий взятия и транспортировки образцов.

1 По данным независимой ветеринарной лаборатории «Поиск» (Санкт-Петербург) на июнь 2019 г.